Expression und Reinigung des GimC-Komplexes

Zur Durchführung funktioneller Studien an Proteinkomplexen und zur Aufklärung derer Struktur mittels Proteinkristallographie ist eine große Menge an gereinigtem Protein von Nöten. Diese Arbeit beschreibt die Herstellung eines Überexpressionsstammes für den Proteinkomplex GimC in der Bäckerhefe S. cerevisiae und die Reinigungsstrategie die entwickelt wurde, um das überexprimierte Protein auf möglichst einfache und effiziente Weise aus den Zellen zu isolieren. Zur Überexpression der einzelnen Untereinheiten des Komplexes wurde der Kupfer-induzierbare CUP1-Promotor verwendet. Als Reinigungsstrategie diente die Affinitätsreinigung mit einem 6His-Epitop und dessen spezifischer Bindung an Ni-NTA-Agarose. Diese Arbeit kann Molekularbiologen und Proteinbiochemikern die auf der Suche nach neuen Strategien zur effizienten Anreicherung und Reinigung von Proteinen/Proteinkomplexen sehr hilfreich sein und beschreibt detailliert die angewendeten Methoden.... Mehr