Antikörper-Partikelkonjugate zur retardierten Freisetzung von Ektoparasitiziden

{"ID":4015950,"post_title":"Antik\u00f6rper-Partikelkonjugate zur retardierten Freisetzung von Ektoparasitiziden","title":"Antik\u00f6rper-Partikelkonjugate zur retardierten Freisetzung von Ektoparasitiziden","post_content":"Die vorliegende Arbeit thematisiert die Biokonjugation von Antik\u00f6rpern an Mikropartikel, welche mit Flumethrin beladen sind. Die erhaltenen Antik\u00f6rper-Partikelkonjugate sind zur ektoparasitiziden Anwendung auf dem Fell von Hunden bestimmt. Es werden Partikel von 1 ? 2 \u00b5m Gr\u00f6sse (d90-Wert der Volumenverteilung) verwendet. Diese bestehen aus dem nicht bioabbaubaren Polymer Polystyrol und sind auf dem Fell aufgrund ihrer Gr\u00f6sse nicht sichtbar. Die Partikel wurden mittels Emulsion-Evaporation Verfahren, wie unter (B.4) beschrieben, hergestellt. Zur Konjugation der Proteine sind die Partikel mit Carboxylgruppen modifiziert. Die Anbindung der Proteine kann auf verschiedenen Wegen erfolgen, wobei zwischen ungerichteten und gerichteten Anbindungsstrategien (A.1.2) unterschieden werden kann. Insgesamt werden drei Synthesewege durchgef\u00fchrt und evaluiert. Die Carbodiimid-Synthese, eine ungerichtete Anbindung, wird vergleichend mit der Polysaccharid-Synthese, welche eine gerichtete Anbindung ist, untersucht. Eine Synthese \u00fcber Thioetherbindungen, die ebenfalls zu einer gerichteten Anbindung f\u00fchrt, wurde praktiziert, aber aufgrund von wenig aussichtsreichen Resultaten nicht weiter verfolgt (C.3.2.2). Die Charakterisierung der AK-Partikelkonjugate wird auf zwei prinzipiell unterschiedlichen Wegen durchgef\u00fchrt. Hierzu ist eine Unterteilung in eine chemisch-physikalische und eine funktionelle Analytik zweckm\u00e4ssig. W\u00e4hrend funktionelle Analysenverfahren die Bindungsf\u00e4higkeit von AK-Partikelkonjugaten bewerten, weisen chemisch-physikalische Analysenverfahren (ge\u00e4nderte) physikochemische Eigenschaften nach, ohne eine Aussage zu machen, ob das erhaltene Konjugat die Funktionalit\u00e4t der Einzelkomponenten vereint. Bei letzterem steht die Analytik mit spektroskopischen Methoden, nasschemischen Nachweisen, sowie den physikalischen Eigenschaften der Partikel im Vordergrund. So k\u00f6nnen durch Messungen des Zetapotentials unter Variation des pH-Wertes Oberfl\u00e4chenmodifikationen im Verlauf von Aktivierungs- und Konjugationsreaktionen mit Antik\u00f6rpern im Detail nachvollzogen werden (C.2.1.1, C.2.2.1). Die einzelnen Aktivierungsschritte der Carbodiimid-Synthese lassen sich mit dieser Methodik zeigen und in Bezug auf ihre Reaktionsgeschwindigkeit charakterisieren. Auch Anbindungen von Antik\u00f6rper sind in einer Verschiebung des Zetapotentials zu gr\u00f6sseren Werten zu sehen. Dies ist durch das Vorhandensein von basischen funktionellen Gruppen der Antik\u00f6rper zu erkl\u00e4ren. Weiterhin kann mittels R\u00f6ntgenelektronen-Spektroskopie die Anwesenheit von Proteinen auf den Mikropartikeln nachgewiesen werden. Hier zeigt sich nach erfolgter Konjugation ein deutliches Signal von Elementen, wie Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, welche in erh\u00f6hten Mengen in der Struktur des Antik\u00f6rpers vorkommen (C.2.2.2). Ein fluorimetrischer Nachweis von Antik\u00f6rpern auf Partikeln unter Verwendung von o-Phtaldialdehyd kann durchgef\u00fchrt werden (C.2.1.3). Eine Untersuchung der Anbindung von Antik\u00f6rpern an Partikel ist zudem durch Raster-Kraft-Mikroskopie m\u00f6glich (C.2.2.3). Die Auflagerung der Antik\u00f6rper ver\u00e4ndert hierbei das Profil der Partikeloberfl\u00e4che gegen\u00fcber unmodifizierten Partikeln. Um der Frage nach der Konjugations-Synthese mit der gr\u00f6sstm\u00f6glichen Bindungsaffinit\u00e4t nachzugehen, wird ein funktioneller Assay entwickelt, der auf mehreren sequenziellen Filtrationsvorg\u00e4ngen beruht und die Menge an Flumethrin an einer Haarprobe quantifiziert (C.1). Die Validit\u00e4t dieses Assays wird nach ICH Guideline Q2(R1) f\u00fcr bioanalytische Verfahren untersucht und entspricht den Anforderungen dieser Guideline. Mit der Methodik kann die Zunahme der Bindungsaffinit\u00e4t von AK-Partikelkonjugaten gegen\u00fcber unkonjugierten Partikeln gezeigt werden (C.2.2.4). Eine Inkubation der AK-Partikelkonjugate mit verschiedenen denaturierenden Agenzien f\u00fchrt, wie erwartet, zu einem Bindungsabfall (C.1.9). Diese Befunde sind elementar und unterstreichen die Validit\u00e4t des Assays. Werden Antik\u00f6rper in einer Orientierung an Partikel gebunden, in der die antigenbindenden Dom\u00e4nen von der Oberfl\u00e4che herausragen, wird von einer gerichteten Synthese gesprochen. Von diesen AK-Partikelkonjugaten ist eine erh\u00f6hte Bindungsaffinit\u00e4t zu erwarten, da keine sterische Behinderung der Antik\u00f6rper-Antigen-Bindung besteht. Mit dem entwickelten Assay gemessene Bindungen von AK-Partikelkonjugaten, die nach der gerichteten Polysaccharid-Synthese erzeugt sind, sind den, mittels ungerichteter Carbodiimid-Synthese generierten, Konjugaten \u00fcberlegen (C.3.2). Diese Feststellung ist zu erwarten und in \u00dcbereinstimmung mit der Literatur. Ein Ph\u00e4nomen, welches bei verschiedenen Konjugations-Synthesen zu beobachten ist, ist eine Agglomeration der erhaltenen AK-Partikelkonjugate. Es wird die Hypothese formuliert, dass dies durch polyionische Wechselwirkungen von dissoziierbaren funktionellen Gruppen auf den Partikeloberfl\u00e4chen nach der Konjugation zu begr\u00fcnden ist. Berechnete Ladungsheterogenit\u00e4ten lassen sich sehr gut mit experimentell ermittelten Partikelgr\u00f6ssen korrelieren, die mittels Laserdiffraktometrie erhoben wurden (C.3.3.2). Eine klinische Untersuchung der Wirkung von flumethrinbeladenen AK-Partikelkonjugaten gegen\u00fcber Zecken an Hunden und eine begleitende HPLC-Analytik von Flumethrin aus Fellproben wurde, nach Validierung dieser, durchgef\u00fchrt (C.4). Die Wirksamkeit gegen\u00fcber Zecken ist in diesem Tierversuch lediglich vergleichbar mit einer nichtretardierten Formulierung von Flumethrin. Eine m\u00f6gliche Ursache hierf\u00fcr kann in einer verminderten Stabilit\u00e4t des Antik\u00f6rpers auf Fellproben bei erh\u00f6hten Lagertemperaturen gefunden werden (C.4.5). Zusammenfassend kann in dieser Arbeit gezeigt werden, dass die Konjugation von spezifischen Antik\u00f6rpern gegen Hundehaar an flumethrinbeladene Mikropartikel gelingt. Verschiedene analytische Methoden werden zur Charakterisierung der AK-Partikelkonjugate herangezogen. Die Bindungsf\u00e4higkeit an Hundehaar kann in vitro durch den Einsatz einer hierf\u00fcr entwickelten, funktionellen analytischen Methode gezeigt werden. Allerdings ist in Bezug auf die klinische Wirksamkeit gegen\u00fcber einer nichtretardierten Darreichungsform keine verbesserte Wirkdauer festzustellen.","image":"https:\/\/images.thalia.media\/00\/-\/527bba8778314b51a0700eaf653cbb71\/antikoerper-partikelkonjugate-zur-retadierten-freisetzung-von-ektoparasitiziden-taschenbuch-alexander-mueller.jpeg","url":"https:\/\/www.vergleiche.ch\/unterhaltung\/product\/antikorper-partikelkonjugate-zur-retardierten-freisetzung-von-ektoparasitiziden\/","min_price":38.89999999999999857891452847979962825775146484375,"low_price_merchant_id":70254503,"deeplink":"https:\/\/www.awin1.com\/pclick.php?p=33697575305&a=401125&m=13971&pref1=9783869559544","ean":9783869559544,"brand":"undefined"}