Affinitätsreifung Hapten-spezifischer rekombinanter Antikörper

Haptene sind niedermolekulare chemische Verbindungen, die selbst nicht immunogen sind, wie Hormone, Pestizide, Antibiotika und Mykotoxine. Antikörper sind Proteine, die in der Lage sind jedes beliebige Molekül zu binden, und können in Immunoassays effizient und kostengünstig zur Detektion von Haptenen eingesetzt werden. In vitro Antikörperbibliotheken und Selektionsmethoden dienen der Herstellung von Antikörpern. Bei einer zu niedrigen Bindungsaffinität, ist eine weitere Verbesserung durch Mutagenese des Antikörpergens und Optimierung des Selektionsprozesses notwendig. Im Rahmen dieser Arbeit wurden verschiedene Mutagenesestrategien zur Herstellung Hapten-spezifischer Antikörperbibliotheken anhand eines Mykotoxin-bindenden ¿single chain¿ Antikörpers (scFv) entwickelt. Eine PCR-Methode wurde etabliert für die Einführung von Diversität in die hypervariable Region 1 der schweren und leichten Kette einzeln und in Kombination. Die resultierenden Antikörperbibliotheken wurden mit einer durch Error-Prone-PCR erstellten verglichen. Mit Hilfe eines optimierten Selektionsverfahrens, bei dem die Stringenz stark erhöht wurde, konnten erfolgreich scFvs mit höherer Affinität isoliert werden.... Mehr